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常規(guī)的農(nóng)藥殘留分析方法為儀器分析法(農(nóng)藥殘留檢測儀),即利用色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、超臨界流體等技術(shù)對農(nóng)藥含量進(jìn)行快速準(zhǔn)確的分析,但這些方法均不能滿足樣品現(xiàn)場快速檢測的要求,這就迫使人們開發(fā)出一些操作方便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確的農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù),包括酶抑制法、免疫分析法、活體生物測定法和生物傳感器法等。
(1)酶抑制法
酶抑制法是利用有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥可特異性地抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性,造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響正常傳導(dǎo),使昆蟲中毒致死這一毒理學(xué)原理,將AChE 與樣品反應(yīng),如果樣品中沒有農(nóng)藥殘留或者殘留量極少,AChE的活性就不被抑制,反之,如果農(nóng)藥殘留量比較高,AChE的活性就會被農(nóng)藥所抑制。在酶反應(yīng)試驗(yàn)中加入底物和顯色劑觀察顏色的變化或測定某種特定化合物反應(yīng)的物理化學(xué)信號的變化,可判斷是否存在有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。依據(jù)酶抑制法原理設(shè)計(jì)的農(nóng)藥殘留檢測方法主要有速測卡法(紙片法)、比色法(分光光度法)和膽堿酯酶生物傳感器。
(2)免疫分析法
免疫分析法是利用抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)檢測各種物質(zhì)(藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等)的分析方法??乖悄軌蛞鹈庖叻磻?yīng)的分子,它是形成特異性免疫反應(yīng)的必備條件。一個(gè)完整的抗原應(yīng)包括2個(gè)基本性質(zhì):一是免疫原性;二是反應(yīng)原性(又稱抗原性或免疫反應(yīng)性)。具備這2種性質(zhì)為完全抗原,僅具有反應(yīng)原性的物質(zhì)稱為半抗原。農(nóng)藥是典型的半抗原,只有反應(yīng)原性而無免疫原性,不能誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生,只有將它們與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合,才能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體??乖涂贵w的制備是免疫分析的關(guān)鍵和基礎(chǔ)的步驟。制備抗原時(shí),如果農(nóng)藥分子自身帶有供偶聯(lián)的活性官能團(tuán)(如氨基、羧基等),則可將農(nóng)藥分子直接與蛋白質(zhì)載體進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng),否則就必須對農(nóng)藥分子進(jìn)行衍生化,接上供偶聯(lián)反應(yīng)的活性官能團(tuán)以合成人工抗原。有許多因素直接影響到能否制備出高質(zhì)量的人工抗原,如選擇合適的中間體、活性官能團(tuán)引入位點(diǎn)的選擇、半抗原產(chǎn)物的分離、間隔臂的長短、半抗原與載體分子的偶聯(lián)比等。根據(jù)標(biāo)記物的不同,用于農(nóng)藥殘留分析的傳統(tǒng)免疫分析法主要有4種:放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析/酶聯(lián)免疫吸附分析(EIA/ELISA)、熒光免疫分析(FIA/PFIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)。其中,EIA/ELISA 是*為常用的農(nóng)藥殘留檢測方法。 [2]
(3)生物傳感器
生物傳感器是將生物分子識別元件(敏感元件)和信號轉(zhuǎn)換元件(換能器)緊密結(jié)合,從而檢測目標(biāo)化合物的分析裝置。其基本原理為:待測物質(zhì)和分子識別元件特異性結(jié)合,發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生的生物學(xué)信息通過信號轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)化為可以定量處理的電、光等信號,再經(jīng)儀表放大和輸出,從而達(dá)到分析檢測的目的。酶、抗體(抗原)、全細(xì)胞(包括微生物、動植物組織)、基因等生物活性物質(zhì)均可用于生物分子識別元件制作,生物活性材料的固定化技術(shù)是制作生物傳感器的核心技術(shù),主要方法有包埋法、吸附法、共價(jià)鍵合法、交聯(lián)法、親和法等。信號轉(zhuǎn)換元件則包括電化學(xué)電極和離子選擇性場效應(yīng)管(ISFET)半導(dǎo)體、光學(xué)元件(如光纖、表面等離子共振)、熱學(xué)熱敏元件、聲學(xué)壓電晶體(如石英晶體微天平、表面聲波)、微機(jī)械懸臂梁等。從生物傳感器中生物分子識別元件上的敏感材料角度,可將生物傳感器分類為酶生物傳感器、免疫生物傳感器、全細(xì)胞(微生物/組織)生物傳感器、基因生物傳感器。其中,農(nóng)藥殘留快速檢測用途的生物傳感器研究和開發(fā)主要集中在酶生物傳感器和免疫生物傳感器上。 [2]
(4)活體生物測定法
活體生物測定法是利用活體生物對待測樣品進(jìn)行農(nóng)藥殘留測定,如使用發(fā)光細(xì)菌或者昆蟲。 [1]
(5)化學(xué)速測法
農(nóng)藥殘留的化學(xué)速測法(農(nóng)藥殘留檢測儀)主要是根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的氧化還原特性。有機(jī)磷農(nóng)藥在金屬離子的催化作用下可水解為醇與磷酸,該水解產(chǎn)物與檢測液(含有顯色劑—紫紅色)反應(yīng)后,使檢測液褪色變成無色。 [4] 此方法的優(yōu)點(diǎn)在于它是化學(xué)反應(yīng),相對生化反應(yīng)方法較穩(wěn)定,同時(shí)避免了使用酶的不穩(wěn)定、不易保存。用化學(xué)方法進(jìn)行檢測所需反應(yīng)時(shí)間只需3 min(不含前處理時(shí)間)。但該方法有時(shí)顏色變化不明顯,不利于判斷,同時(shí)在使用過程中易受到植物組織和葉綠體的干擾,故只能檢測葉片和果品表面的農(nóng)藥殘留。
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